Общий белок в моче агат

КУПИТЬ Общий белок Агат на 200 определений
КУПИТЬ Общий белок Агат на 400 определений

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Департамента государственного контроля

качества, эффективности, безопасности лекарственных

средств и медицинской техники МЗ РФ

Р.У. Хабриев

17.06.2000 г/

Рекомендована к утверждению

Комиссией по лабораторным реагентам

 Комитета по новой медицинской технике МЗ РФ 

(протокол № 2 от 28.02.2000 г.)

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов для определения общего белка в сыворотке и плазме крови биуретовым методом

НАЗНАЧЕНИЕ 

Набор предназначен для количественного определения содержания общего белка в сыворотке или плазме крови в клинико-диагностических и биохимических лабораториях. 

Набор рассчитан на 400 определений (арт. 13038) или на 200 определений (арт. 19088) при расходе 5,0 мл рабочего раствора биуретового реагента на один анализ.

ПРИНЦИП МЕТОДА

Ионы меди в щелочной среде взаимодействуют с пептидными связями белков сыворотки крови с образованием комплекса красного цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации общего белка и измеряется фотометрически  при длине волны 540 (500–560) нм.

СОСТАВ НАБОРА

1. Биуретовый реагент, концентрат (медь сернокислая – 120 ммоль/л, калий йодистый – 300 ммоль/л, калий-натрий виннокислый – 320 ммоль/л, натрия гидроокись – 3 моль/л), 100 мл (50 мл для набора ОБЩИЙ БЕЛОК АГАТ арт. 19088) – 1 флакон.

2. Калибровочный раствор общего белка (раствор бычьего сывороточного альбумина с концентрацией 60 г/л с добавлением хлористого натрия 9 г/л и азида натрия 1 г/л), 2 мл – 2 флакона (1 флакон для набора ОБЩИЙ БЕЛОК АГАТ арт. 19088).

 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Линейная область определения концентрации общего белка – в диапазоне от 20 до 120 г/л, отклонение от линейности – не более 3%.

Чувствительность определения – не более 10 г/л.

Воспроизводимость: коэффициент вариации не более 3%.

Нормальные величины концентрации общего белка в сыворотке (плазме) крови составляют:

– у взрослого человека 65–85 г/л;

– у новорожденных до 1 месяца 44–76 г/л;

– у детей до 1 года 51–73 г/л;

– у детей старше 1 года 60–80 г/л.

Качество набора можно оценивать по контрольным сывороткам, аттестованным данным методом.

Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин у обследуемого контингента.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

При работе с данным набором необходимо соблюдать правила техники безопасности, рекомендуемые при работе с кровью в соответствии с «Инструкцией по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебных и профилактических учреждений», утвержденной Минздравом СССР от 17.01.91 г., и «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР». 

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита  или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

Биуретовый реактив содержит щелочь, едкое вещество. В случае попадания раствора на кожу и слизистые необходимо сразу же промыть пораженное место большим количеством проточной воды. Пипетирование per os категорически запрещается. При попадании внутрь следует немедленно выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.

Другие компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.

ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ

– Спектрофотометр, длина волны 540 нм, или фотоэлектроколориметр, длина волны 500–560 нм (зеленый светофильтр), кювета с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм;

– пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,10 и 5,0 мл;

– колба мерная вместимостью 2,0 л;

– пробирки вместимостью 5–10 мл;

– секундомер;

– вода дистиллированная;

– перчатки резиновые или пластиковые.

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Негемолизированная сыворотка или плазма крови. 

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

Рабочий раствор биуретового реагента. Концентрат биуретового реагента развести дистиллированной водой в соотношении 1:19 (содержимое флакона – на 2 л раствора).

Калибровочный раствор общего белка готов к применению. 

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

В пробирки внести реактивы по следующей схеме:

Примечание: При использовании кювет другого объема расход реактивов может быть пропорционально изменен с сохранением соотношения объема образца к объему рабочего раствора 1:50.

Содержимое пробирок тщательно перемешать, избегая образования пены,  инкубировать при комнатной температуре (+18–25° С) в течение 30 минут, после чего измерить величину оптической плотности калибровочной и опытных проб против контрольной (холостой) пробы при длине волны 540 (500–560) нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 1 см. 

Окраска устойчива в течение 1 часа.

РАСЧЕТЫ

Концентрацию общего белка рассчитать по формуле:

 Eо

С = ——— x  60 ,

 Eк

где: С  – концентрация общего белка в опытной пробе, г/л;

Eо – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плотн.;

Eк – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плотн.;

60 – концентрация общего белка в калибровочном растворе, г/л.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–8° С в течение всего срока годности. Допускается хранение  наборов  при температуре до +25° С не более 5 суток. 

Срок годности набора – 2 года.

Рабочий раствор биуретового реагента может храниться в темном месте в плотно укупоренной пластиковой посуде при комнатной температуре (+18–25° С) в течение 1 года.

Биуретовый реагент концентрат после вскрытия флакона может храниться в укупоренном виде при температуре +2–8° С в течение всего срока годности набора.

Калибровочный раствор общего белка после вскрытия флакона может храниться в укупоренном виде при температуре +2–8° С в течение 6 месяцев, но не более срока годности набора.

При концентрации общего белка выше, чем 120 г/л, исследуемый образец необходимо развести дистиллированной водой в соотношении 1:1, повторить анализ и полученный результат умножить на 2.

По вопросам, касающимся приобретения наборов и их качества, просим обращаться по адресу: 105173, г. Москва, ул. Западная, д. 2, стр. 1, ООО «Агат–Мед». Телефон для справок: (495) 777-41-92.

Инструкция составлена: к.б.н. И.В. Смирновым – зав. лабораторией ГНЦ РАМН, В.В. Майоровой – сотрудником ООО «Агат-Мед».

Регистрационные удостоверения

Назад к списку инструкций

Это клинико-лабораторный признак поражения почек, используемый для диагностики их заболеваний и контроля за лечением.

Синонимы английские

Urine total protein, urine protein, 24-Hour Urine Protein.

Метод исследования

Колориметрический фотометрический метод.

Единицы измерения

Г/л (грамм на литр), г/сут. (грамм в сутки).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Среднюю порцию утренней мочи, суточную мочу.

Как правильно подготовиться к исследованию?

1. Не употреблять алкоголь в течение 24 часов до исследования.
2. Исключить прием мочегонных препаратов в течение 48 часов до сдачи мочи (по согласованию с врачом).

Общая информация об исследовании

Белок общий в моче – это ранний и чувствительный признак первичных заболеваний почек и вторичных нефропатий при системных заболеваниях. В норме лишь незначительное количество белка теряется с мочой благодаря фильтрационному механизму почечного клубочка – фильтра, препятствующего проникновению крупных заряженных белков в первичный фильтрат. В то время как низкомолекулярные белки (менее 20 000 дальтон) свободно преодолевают клубочковый фильтр, поступление высокомолекулярного альбумина (65 000 дальтон) ограниченно. Большая часть белка реабсорбируется в кровоток в проксимальных канальцах почки, в результате чего лишь его малое количество в итоге выделяется с мочой. Около 20 % выделяемого в норме белка составляют низкомолекулярные иммуноглобулины, и по 40 % приходится на альбумин и мукопротеины, секретируемые в дистальных почечных канальцах. Потеря белка в норме составляет 40-80 мг в сутки, выделение более 150 мг в сутки называется протеинурией. При этом основное количество белка приходится на альбумин.

Следует отметить, что в большинстве случаев протеинурия не является патологическим признаком. Белок в моче определяется у 17 % населения и только у 2 % из них служит причиной серьезного заболевания. В остальных случаях протеинурия рассматривается как функциональная (или доброкачественная); она наблюдается при многих состояниях, таких как лихорадка, повышенная физическая нагрузка, стресс, острое инфекционное заболевание, дегидратация. Такая протеинурия не связана с заболеванием почек, и потеря белка при ней незначительна (менее 2 г/сутки). Одной из разновидностей функциональной протеинурии является ортостатическая (постуральная) протеинурия, когда белок в моче обнаруживается только после длительного стояния или ходьбы и отсутствует при горизонтальном положении. Поэтому при ортостатической протеинурии анализ на общий белок утренней порции мочи будет отрицательным, а анализ суточной мочи выявит присутствие белка. Ортостатическая протеинурия встречается у 3-5 % людей до 30 лет.

Белок в моче также появляется в результате его избыточного образования в организме и усиленной фильтрации в почках. При этом количество белка, поступившего в фильтрат, превосходит возможности реабсорбции в почечных канальцах и в итоге выделяется с мочой. Такая протеинурия «переполнения» также не связана с заболеваниями почек. Она может сопровождать гемоглобинурию при интраваскулярном гемолизе, миоглобинурию при повреждении мышечной ткани, множественную миелому и другие заболевания плазматических клеток. При таком варианте протеинурии в моче присутствует не альбумин, а какой-либо специфический белок (гемоглобин при гемолизе, белок Бенс-Джонса при миеломе). В целях выявления специфического белка в моче применяют анализ суточной мочи.

Для многих заболеваний почек протеинурия является характерным и постоянным признаком. По механизму возникновения ренальную протеинурию разделяют на клубочковую и тубулярную. Протеинурия, при которой белок в моче появляется в результате повреждения базальной мембраны, называется клубочковой. Базальная мембрана клубочков – основной анатомический и функциональный барьер для крупных и заряженных молекул, поэтому при ее повреждении белки свободно поступают в первичный фильтрат и экскретируются с мочой. Повреждение базальной мембраны может возникать первично (при идиопатическом мембранозном гломерулонефрите) или вторично, как осложнение какого-либо заболевания (при диабетической нефропатии на фоне сахарного диабета). Наиболее распространена клубочковая протеинурия. К заболеваниям, сопровождающимся повреждением базальной мембраны и клубочковой протеинурией, относятся липоидный нефроз, идиопатический мембранозный гломерулонефрит, фокальный сегментарный гломерулярный склероз и другие первичные гломерулопатии, а также сахарный диабет, болезни соединительной ткани, постстрептококковый гломерулонефрит и другие вторичные гломерулопатии. Клубочковая протеинурия также характерна для поражения почек, связанного с приемом некоторых лекарств (нестероидных противовоспалительных препаратов, пеницилламина, лития, опиатов). Самой частой причиной клубочковой протеинурии является сахарный диабет и его осложнение – диабетическая нефропатия. Для ранней стадии диабетической нефропатии характерна секреция небольшого количества белка (30-300 мг/сут), так называемая микроальбуминурия. При прогрессировании диабетической нефропатии потеря белка увеличивается (макроальбуминемия). Степень клубочковой протеинурии различна, чаще превышает 2 г в сутки и может достигать более 5 г белка в сутки.

При нарушении функции реабсорбции белка в почечных канальцах возникает тубулярная протеинурия. Как правило, потеря белка при этом варианте не достигает таких высоких значений, как при клубочковой протеинурии, и составляет до 2 г в сутки. Нарушением реабсорбции белка и тубулярной протеинурией сопровождаются гипертензивный нефроангиосклероз, уратная нефропатия, интоксикация солями свинца и ртути, синдром Фанкони, а также лекарственная нефропатия при применении нестероидных противовоспалительных препаратов и некоторых антибиотиков. Самой частой причиной тубулярной протеинурии является гипертоническая болезнь и ее осложнение – гипертензивный нефроангиосклероз.

Увеличение белка в моче наблюдается при инфекционных заболеваниях мочевыделительной системы (цистите, уретрите), а также при почечно-клеточном раке и раке мочевого пузыря.

Потеря значительного количества белка с мочой (более 3-3,5 г/л) приводит к гипоальбуминемии, снижению онкотического давления крови и как внешним, так и внутренним отекам (отекам нижних конечностей, асциту). Значительная протеинурия позволяет дать неблагоприятный прогноз хронической почечной недостаточности. Стойкая потеря небольшого количества альбумина не проявляется какими-либо симптомами. Опасность микроальбуминурии заключается в повышенном риске ишемической болезни сердца (в особенности инфаркта миокарда).

Достаточно часто в результате самых разных причин анализ утренней мочи на общий белок бывает ложноположительным. Поэтому протеинурия диагностируется только после повторного анализа. При положительных двух и более анализах утренней порции мочи на общий белок протеинурия считается стойкой, а обследование дополняется анализом суточной мочи на общий белок.

Исследование утренней порции мочи на общий белок является скрининговым методом обнаружения протеинурии. Он не позволяет оценить степень протеинурии. Кроме того, метод чувствителен к альбумину, но не выявляет низкомолекулярные белки (например, белок Бенс-Джонса при миеломе). Для того чтобы определить степень протеинурии у пациента с положительным результатом анализа утренней порции мочи на общий белок, на общий белок исследуется и суточная моча. При подозрении на множественную миелому анализу также подвергается суточная моча, причем необходимо  проводить дополнительное исследование на специфические белки – электрофорез. Следует отметить, что анализ суточной мочи на общий белок не дифференцирует варианты протеинурии и не выявляет точной причины заболевания, поэтому его необходимо дополнять некоторыми другими лабораторными и инструментальными методами.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики липоидного нефроза, идиопатического мембранозного гломерулонефрита, фокального сегментарного гломерулярного склероза и других первичных гломерулопатий.
• Для диагностики поражения почек при сахарном диабете, системных заболеваниях соединительной ткани (системной красной волчанке), амилоидозе и других мультиорганных заболеваниях с возможным вовлечением почек.
• Для диагностики поражения почек у пациентов с повышенным риском хронической почечной недостаточности.
• Чтобы оценить риск развития хронической почечной недостаточности и ишемической болезни сердца у пациентов с заболеваниями почек.
• Для оценки функции почек при лечении нефротоксичными препаратами: аминогликозидами (гентамицином), амфотерицином В, цисплатином, циклоспорином, нестероидными противовоспалительными препаратами (аспирином, диклофенаком), ингибиторами АПФ (эналаприлом, рамиприлом), сульфонамидами, пенициллином, тиазидом, фуросемидом и некоторыми другими.

Когда назначается исследование?

• При симптомах нефропатии: отеках нижних конечностей и периорбитальной области, асците, прибавке в весе, артериальной гипертензии, микро- и макрогематурии, олигурии, повышенной утомляемости.
• При сахарном диабете, системных заболеваниях соединительной ткани, амилоидозе и других мультиорганных заболеваниях с возможным вовлечением почек.
• При имеющихся факторах риска хронической почечной недостаточности: артериальной гипертензии, курении, наследственности, возрасте больше 50 лет, ожирении.
• При оценке риска развития хронической почечной недостаточности и ишемической болезни сердца у пациентов с заболеваниями почек.
• При назначении нефротоксичных препаратов: аминогликозидов, амфотерицина В, цисплатина, циклоспорина, нестероидных противовоспалительных препаратов, ингибиторов АПФ, сульфонамидов, пенициллинов, тиазидовых диуретиков, фуросемида и некоторых других.

Что означают результаты?

Референсные значения (средняя порция утренней мочи)

Концентрация:

Референсные значения (суточная моча)

Выделение:

после тяжелой физической нагрузки

в покое

Причины повышения уровня общего белка в моче:

1. Заболевания почек:

• первичные заболевания почек: липоидный нефроз, идиопатический мембранозный гломерулонефрит, фокальный сегментарный гломерулярный склероз, IgA-гломерулонефрит, мембранопролиферативный гломерулонефрит, пиелонефрит, синдром Фанкони, острый тубулоинтерстициальный нефрит;
• поражения почек при системных заболеваниях: сахарном диабете, артериальной гипертензии, системных заболеваниях соединительной ткани, амилоидозе, постстрептококковом гломерулонефрите, преэклампсии, уратной нефропатии, злокачественных новообразованиях (легких, желудочно-кишечного тракта, крови), серповидно-клеточной анемии и др.;
• поражение почек при лечении нефротоксическими препаратами: аминогликозидами, амфотерицином В, цисплатином, циклоспорином, нестероидными противовоспалительными препаратами, ингибиторами АПФ, сульфонамидами, пенициллинами, тиазидами, фуросемидом и некоторыми другими;
• поражение почек при отравлении солями свинца и ртути;
• почечно-клеточная карцинома.

2. Увеличение образования и фильтрации белка в организме (протеинурия «переполнения»):

• множественная миелома, макроглобулинемия Вальденстрема;
• гемоглобинурия при интраваскулярном гемолизе;
• миоглобинурия при поврежеднии мышечной ткани.

3. Транзиторная (доброкачественная) протеинурия:

• дегидратация, стресс, диета с высоким содержанием белка, значительная физическая нагрузка, лихорадка;
• ортостатическая протеинурия.

4. Другие причины:

• застойная сердечная недостаточность, подострый инфекционный эндокардит;
• гипертиреоз;
• заболевания центральной нервной системы;
• рак мочевого пузыря;
• кишечная непроходимость;
• травма и другие.

Понижение уровня общего белка в моче не является диагностически значимым.

Что может влиять на результат?

Ложноположительный показатель может быть получен при:

• применении лекарственных препаратов (аспирина, хлорпромазина, пенициллина, радиоконтрастных веществ, бикарбоната натрия, сульфонамидов, ацетазоламида);
• при макрогематурии, лейкоцитурии.

Ложноотрицательному результату способствуют:

• низкая относительная плотность мочи (менее 1,015), щелочная реакция мочи (pH более 7,5), уреаза-положительная микрофлора (Proteus mirabilis, Proteus vulgaris);
• наличие специфических белков (белка Бенс-Джонса, миоглобина).



Важные замечания

В ходе данного исследования определяется общее количество белка, выделяющегося с мочой.

Для определения различных фракций белка могут быть использованы следующие тесты:

• [06-114] Альбумин в моче (микроальбуминурия)
• [40-505] Альбумин-креатининовое соотношение (альбуминурия в разовой порции мочи)
• [08-019] Бета-2-микроглобулин в моче
• [13-123] Электрофорез белков мочи с определением типа протеинурии

Также рекомендуется

• Общий анализ мочи с микроскопией осадка
• Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
• Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
• Антистрептолизин О
• С3 компонент комплемента
• С4 компонент комплемента
• Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
• Глюкоза в плазме
• Альбумин в сыворотке
• Холестерол общий
• Калий, натрий, хлор в сыворотке
• Кальций ионизированный
• Фосфор в сыворотке
• Мочевая кислота в сыворотке

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, нефролог, эндокринолог, кардиолог.

Литература

• Naderi AS, Reilly RF. Primary care approach to proteinuria. J Am Board Fam Med. 2008 Nov-Dec;21(6):569-74.
• Johnson DW. Global proteinuria guidelines: are we nearly there yet? Clin Biochem Rev. 2011 May;32(2):89-95.
• Chernecky C. C. Laboratory Tests and Diagnostic Procedures / С.С. Chernecky, В.J. Berger; 5th ed. — Saunder Elsevier, 2008.
• Kashif W, Siddiqi N, Dincer AP, Dincer HE, Hirsch S. Proteinuria: how to evaluate an important finding. Cleve Clin J Med. 2003 Jun;70(6):535-7, 541-4, 546-7.
• Carroll MF, Temte JL. Proteinuria in adults: a diagnostic approach. Am Fam Physician. 2000 Sep 15;62(6):1333-40.