Иммунохимическое исследование белков сыворотки и мочи
Содержание статьи
оказания к иммунохимическому исследованию крови, плазмы, биологических жидкостей
Показания к иммунохимическому исследованию крови, плазмы, биологических жидкостейПрямыми показаниями к иммунохимическому исследованию принято считать клинические и лабораторные признаки, которые могут быть проявлением как непосредственно В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний (в первую очередь парапротеинемических гемобластозов), так и связанной с ними белковой патологии. Один из самых частых лабораторных признаков, заставляющих предположить наличие парапротеинемии, — повышение СОЭ (особенно не связанное с реактивными состояниями и другими очевидными причинами), которое в данном случае является результатом увеличения глобулиновой фракции сыворотки крови за счет моноклонального иммуноглобулина. Следует отметить, что белок Бенс-Джонса, который является микроглобулином, не отражается на уровне СОЭ, что в части случаев вызывает диагностические затруднения и неоправданный отказ от исследований для выявления моноклональной секреции. Другой широко известный симптом парапротеинемии — повышение уровня общего белка сыворотки крови за счет фракции глобулинов. Необходимо помнить, что это не абсолютный признак и связан он с далеко зашедшим заболеванием, когда масса опухоли значительна. Выраженные поликлональные гипергаммаглобулинемии характеризуются такой же биохимической картиной. Еще одно проявление парапротеинемии — синдром гипервязкости. Его развитие обусловлено не только общим содержанием М-компонента, но и качеством моноклонального иммуноглобулина: высокомолекулярные парапротеины (IgM, полимерный IgA), а также белки, склонные к образованию крупных циркулирующих агрегатов (например, моноклональный IgG3), наиболее часто приводят к появлению гипервязкости. Описаны единичные случаи развития синдрома гипервязкости при миеломе Бенс-Джонса к-типа. В этих случаях моноклональные L-цепи проявляли необычную способность к агрегации, образуя комплексы с молекулярной массой до нескольких миллионов дальтон. Такие состояния, как упорная протеинурия, особенно в отсутствие клеточного осадка, острая или хроническая почечная недостаточность, могут быть первыми симптомами секреции белка Бенс-Джонса. При этом отсутствуют такие привычные признаки миеломной болезни, как повышение СОЭ и гиперпротеинемия, а протеинурия может быть минимальной и ошибочно оценивается как проявление пиелонефрита. В таких случаях диагностика очень сложна, тем более что пациенты этой группы, как правило, попадают под наблюдение гематолога поздно, а в основном находятся на лечении в нефрологических отделениях. При клинических проявлениях холодовой гемагглютинации пациент должен быть обследован на наличие моноклонального макроглобулина, практически всегда к-типа, проявляющего антительную активность по отношению к I-антигену мембраны эритроцитов. Оптимум активности этих антител приходится на температуру ниже температуры тела, чем и объясняются особенности клинической картины этого заболевания. Синтез моноклональных Холодовых агглютининов может быть связан с лимфопролиферативным процессом. В таких случаях секреция, как правило, очень незначительна и при рутинном исследовании в биохимической лаборатории обычно не выявляется. Наличие клинических и лабораторных признаков криоглобулинемии должно насторожить в отношении моноклональной секреции, поскольку почти в половине случаев криоглобулинемия зависит от присутствия парапротеина в сыворотке крови. Тяжесть клинической симптоматики обусловливается не столько концентрацией криоглобулина, сколько температурой осаждения. В то же время установлено, что при повышении концентрации криоглобулинов температура криопреципитации может повышаться, приближаясь к температуре тела.
Криоглобулинемия I типа выявляется главным образом при миеломной болезни или макроглобулинемии Вальденстрема. Симптоматика связана с отложением криопреципитата в основном в сосудах кожи, что приводит к развитию геморрагического или язвенно-геморрагического васкулита, синдрома Рейно. Криоглобулинемия II типа, при которой парапротеин обладает активностью ревматоидного фактора, ассоциируется с лимфомами, хроническим лимфолейкозом, макроглобулинемией Вальденстрема, миеломной болезнью. Кроме того, она может быть связана с инфицированием вирусом гепатита С или В. Среди клинических проявлений отмечаются характерные признаки иммунокомплексной патологии: васкулит, артрит, гломерулонефрит. В ряде случаев первым и некоторое время единственным проявлением заболевания, сопровождающегося моноклональной секрецией, может быть развитие AL-амилоидоза с характерной для него клинической картиной. В состав амилоида данного вида входят моноклональные L-цепи или их вариабельные районы (VL), причем преобладают Х-цепи, которые встречаются приблизительно в 2 раза чаще, чем к-цепи. Именно в составе амилоида была идентифицирована новая подгруппа Х-цепей (XVI), которая особенно часто является причиной развития AL-амилоидоза. При исследовании аминокислотного состава амилоида и белков-предшественников обнаружено замещение части гидрофильных аминокислотных остатков в консервативной области вариабельных доменов на гидрофобные, что сказывается на ухудшении растворимости белка и склонности к образованию агрегатов. Присущая таким белкам «амилоидогенность» была продемонстрирована в опытах in vivo: при введении мышам очищенных белков Бенс-Джонса, полученных от больных с амилоидозом, развивался типичный амилоидоз, причем в состав амилоида входили введенные моноклональные L-цепи. Типичным показанием к проведению иммунохимического исследования являются остеодеструкции плоских костей, особенно единичные и труднодоступные для биопсии. Неясные по происхождению плазмоцитозы костного мозга, особенно при умеренном повышении содержания плазматических клеток, также нуждаются в иммунохимической характеристике при проведении дифференциальной диагностики. Подозрение на наличие М-градиента при рутинном лабораторном исследовании (ЭФ в биохимической лаборатории) должно служить поводом для развернутого иммунохимического исследования, учитывая рассмотренные ранее случаи возникновения ложных М-градиентов. Частые инфекции легких, верхних дыхательных путей, мочеполовой системы (иногда в дебюте заболеваний, связанных с В-клеточной пролиферацией) следует расценивать как проявление вторичной гипогаммаглобулинемии. Ее генез сложен и связан как со снижением количества нормальных В-клеток, так и с нарушением межклеточных взаимодействий, регулирующих синтез иммуноглобулинов. При рецидивирующих, плохо поддающихся лечению инфекционных осложнениях пациент нуждается как минимум в оценке уровня сывороточных иммуноглобулинов. Кроме того, перед назначением заместительной терапии препаратами у-глобулинов, особенно вводимыми внутривенно, при любых заболеваниях необходимо исследование сывороточных иммуноглобулинов для исключения первичного селективного IgA-дефицита. Этот самый распространенный из первичных гуморальных иммунодефицитов (частота в популяции достигает 1:700) в ряде случаев протекает бессимптомно. Повторное введение таким больным препарата у-глобулина, содержащего чужеродный для них белок IgA, приводит к развитию выраженных реакций. Иммунохимические исследования периодически проводят в ходе лечения больных парапротеинемическими гемобластозами и с другими секретирующими В-клеточными опухолями для оценки эффективности лечения, а также пациентам с моноклональными гаммапатиями неясного генеза (МГНЗ). — Также рекомендуем «Моноклональные гаммапатии неясного генеза (МГНГ) — причины, варианты, диагностика» Оглавление темы «Макроглобулинемии — парапротеины»:
|
Источник
Скрининг миеломной болезни и парапротеинемий (иммунофиксация сыворотки крови с пентавалентной сывороткой)
Данный тест предназначен для обнаружения моноклонального иммуноглобулина (парапротеина) с помощью сочетания таких методов, как клинический электрофорез и иммунофиксация. В результате разделения белков сыворотки крови путем электрофореза парапротеин (также его называют М-пиком Или М-градиентом) претерпевает миграцию в виде компактной полосы, что делает его заметным на фоне других белков фракций. Метод иммунофиксации позволяет достоверно выявить моноклональный иммуноглобулиновый компонент и определить его абсолютное содержание в сыворотке крови.
Синонимы русские
Электрофоретическое разделение белков сыворотки крови, клинический электрофорез и иммунофиксация, скрининг болезни Рустицкого-Калера, скрининг миеломы, скрининг миеломатоза, скрининг ретикулоплазмоцитоза, скрининг генерализованной плазмоцитомы.
Синонимы английские
Serum protein electrophoresis, immunofixation electrophoresis, multiple myelomascreening, plasmacellscancerscreening, plasmacell myeloma screening, monoclonal gammopathy screening.
Метод исследования
Иммунофиксация.
Единицы измерения
Г/л (грамм на литр).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Диагностика миеломной болезни проводится с помощью симбиоза двух методов исследования – клинического электрофореза и иммунофиксации – и заключается в выявлении присутствия парапротеина в сыворотке крови для его последующего типирования. С помощью данного исследования можно выявить не только миеломную болезнь, но и другие лимфопролиферативные заболевания, а также амилоидоз, полинейропатию, гемолитические анемии, криоглобулинемию, поражения почек.
Основным признаком данных заболеваний с точки зрения лабораторной диагностики является увеличение синтеза иммуноглобулина. Метод электрофореза позволяет разделить белки сыворотки крови и выделить иммуноглобулин – в результате расщепления он выделяется на фоне других белковых фракций в виде мигрирующей полосы. Этот иммуноглобулин называется парапротеином (также его называют моноклональным иммуноглобулином, М-пиком или М- градиентом). Именно он является онкомаркером при наличии у пациента гематоонкологических заболеваний.
Клинические проявления миеломной болезни связаны с разрушением костей – это могут быть патологические переломы, боли в костях, анемический синдром, снижение гемоглобина в крови, синдром гипервязкости, тромбозы и кровотечения. Разрушение костей приводит к увеличению количества кальция в крови, что в свою очередь влечет за собой кальциевые отложения в почках, легких и на слизистой желудка. Также при миеломной болезни наблюдаются частые бактериальные инфекции у пациента – это связано с падением количества нормальных иммуноглобулинов и нарушениями процесса образования антител.
Наличие множественной миеломы напрямую связано с пролиферацией плазмацитов, способных секретировать парапротеин или его фрагменты. На момент диагноза концентрация моноклонального иммуноглобулина в сыворотке крови чаще всего превышает 25 г/л. Контроль и наблюдение за изменением уровня концентрации парапротеина позволяет проводить мониторинг состояния пациента и оценку эффективности лечения миеломы. При наличии заболевания контрольные анализы для наблюдения за изменением уровня концентрации парапротеинана на фоне терапии должны проводиться каждые 3 месяца.
При миеломе парапротеин в сыворотке крови в 60 % случаев представлен IgG, 20 % приходится на IgA. Эти 20 % относятся к определению миеломы Бенс-Джонса – в этом случае необходимо также проконтролировать продукцию свободных легких цепей (каппа или лямбда) и их наличие в моче. Достаточно редко (в 2–4 % случаев) при наличии миеломы может также отмечаться присутствие биклонального парапротеина.
Лимфома, при которой активно продуцируется моноклональный IgM, называется макроглобулинемией Вальденстрема. При данном типе лимфомы опухолевые клетки диффузно распределяются в селезенке, костном мозге и лимфоузлах. Увеличивается вязкость крови и проявляется ряд клинических симптомов: слепота, спутанность сознания, склонность к кровоточивости, гипертензия, сердечная недостаточность – это связано с повышением концентрации моноклонального IgM до 30 г/л и более. При других типах лимфомконцентрация парапротеинов класса IgM обычно не превышает 30 г/л, хотя они и обнаруживаются у 20 % пациентов.
Помимо перечисленного, моноклональный парапротеин может быть обнаружен при некоторых неопухолевых заболеваниях. Это может быть эссенциальная криоглобулинемия, парапротеинемическая хроническая полинейропатия, холодовая гемолитическая анемия, АL-амилоидоз почек и внутренних органов, болезнь отложения легких цепей. Также парапротеин в сыворотке крови обнаруживается при болезни Кастелмана, POEMS-синдроме и микседематозном лишае.
В случае если парапротеинемия не прогрессирует во множественную миелому или другое заболевание в течение 5 лет, речь идёт о доброкачественной парапротеинемии. В этом случае концентрация парапротеина обычно ниже 3 г/л.
Согласно статистике, парапротеинемия чаще всего выявляется у пациентов старше 50 лет. У лиц старше 65 лет выявляемость заболевания достигает 4-10 %. В большинстве случаев это бессимптомные моноклональные гаммапатии невыясненного значения (МГНЗ) – это парапротеинемия без других признаков онкогематологического заболевания. В этом случае не требуется постоянный мониторинг концентрации.
При выявлении парапротеинемии у пациентов моложе 50 лет необходимо проводить контрольные повторные обследования. Это связано с повышенным риском развития множественной миеломы. В случае обнаружения концентрации парапротеина выше 15 г/л необходимо провести ряд дополнительных исследований: электрофорез 24-часового образца мочи и иммунофиксация каждые 3-6 месяцев.
Для чего используется исследование?
- Диагностика причины клинической симптоматики (болей в спине, спонтанных переломов, частых бактериальных инфекций, полиневрита, гемолитической анемии, нефротического синдрома, кожной пурпуры, синдрома повышенного СОЭ, гиперкальциемии, амилоидоза внутренних органов, эндокринопатии, органомегалии).
- Мониторинг уровня концентрации парапротеинов при моноклональнойгаммапатии невыясненного значения.
- Оценка эффективности проводимой терапии при миеломе и других гаммапатиях.
Что означают результаты?
Референсные значения: парапротеина (IgG, A, M, каппа/лямбда) не обнаружено.
Парапротеин в сыворотке крови присутствует в случае наличия у пациента:
- транзиторной парапротеинемии;
- моноклональной гаммапатии невыясненного значения;
- доброкачественной парапротеинемии;
- парапротеинемической полинейропатии;
- криоглобулинемии;
- холодовой гемолитической анемии;
- AL-амилоидоза или болезни отложения легких цепей;
- миседематозного лишая;
- POEMS-синдрома (полинейропатии с органомегалией);
- множественной миеломы;
- макроглобулинемии Вальденстрема;
- лимфомы и ХЛЛ (хронического лимфолейкоза);
- болезни тяжелых цепей.
Отсутствие парапротеина в сыворотке крови позволяет практически полностью исключить вероятность диагноза «гаммапатия» (для подтверждения необходимо исключить присутствие белка Бенс-Джонса в моче).
Важные замечания
Интерпретация результатов исследования не является диагнозом и содержит информацию для лечащего врача для использования информации наряду с другими источниками (анамнеза, истории болезни, других исследований).
Также рекомендуется
[02-005] Клинический анализ крови (c лейкоцитарной формулой)
[40-063] Клинический и биохимический анализ крови — основные показатели
[08-018] Бета-2-микроглобулин в сыворотке
[08-019] Бета-2-микроглобулин в моче
Кто назначает исследование?
Онколог, терапевт, гематолог, нефролог, уролог.
Литература
1. Лапин С.В. Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Издательство»Человек», СПб- 2010.
2. Tietz Clinical guide to laboratorytests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B.- USA,W.B Sounders Company, 2006,1798 p.
3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Organ Specific Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2011.
4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2007.
5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science – 2006.
6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteriain Autoimmune Diseases / Human Press – 2008.
Источник
Скрининг парапротеинемий в сыворотке крови с помощью иммунофиксации в %CITY_P%
- Приём, исследование биоматериала
- Описание
Приём и исследование биоматериала
Приём материала
- Можно сдать в отделении Гемотест
- Можно сдать анализ дома
Подробное описание исследования
При пролиферации клона плазматических клеток увеличивается синтез иммуноглобулина, представленного одним классом, подклассом и изотипом, в состав которого входят тяжелые и легкие белковые цепи одного типа. При электрофоретическом разделении белков сыворотки крови этот иммуноглобулин мигрирует в виде компактной полосы, которая определяется на фоне других белковых фракций. Такой иммуноглобулин называют моноклональным иммуноглобулином или парапротеином. При электрофорезе белков сыворотки его иногда называют М-пиком или М-градиентом. Парапротеин является онкомаркером при ряде гематоонкологических заболеваний.
Множественная миелома является классическим гематологическим заболеванием, которое обусловлено пролиферацией плазмацитов, секретирующих моноклональный иммуноглобулин (парапротеин) или его фрагменты. В большинстве случаев на момент диагноза концентрация парапротеина превышает 25 г/л.
При миеломе парапротеин в сыворотке крови чаще всего представлен IgG (60%), реже IgA (20%). Оставшиеся около 20% случаев приходятся на миелому Бенс-Джонса, связанную с продукцией свободных легких цепей каппа или лямбда (20%), которые могут быть обнаружены в моче. В 2–4% случаев миеломы может отмечаться биклональный парапротеин, представленный иммуноглобулинами разных классов или одного класса, но содержащий легкие цепи разных классов. Изменения концентрации парапротеина служит показателем эффективности лечения миеломы. Мониторинг концентрации ПП при миеломе на фоне терапии должен осуществляться каждые 3 месяца. Если содержание ПП снизилось ниже детектируемого, повторное измерение целесообразно проводить через 6 или 12 месяцев.
Макроглобулинемия Вальнедстрема представляет собой лимфому с продукцией моноклонального IgM. Лимфоплазмацитарные опухолевые клетки с характерным иммунофенотипом диффузно распределены в лимфатических узлах, селезенке и костном мозге. Высокая концентрация моноклонального IgM часто превышает 30 г/л и приводит к увеличению вязкости крови и ряду клинических проявлений, включающих спутанность сознания, слепоту, склонность к кровоточивости, сердечную недостаточность и гипертензию. При других разновидностях лимфом и хроническом лимфолейкозе парапротеины класса IgM отмечается у 20% больных, однако концентрация ПП обычно ниже, чем 30 г/л.
Моноклональный парапротеин может быть обнаружен при ряде неопухолевых заболеваний, в частности эссенциальной криоглобулинемии, парапротеинемической хронической полинейропатии, холодовой гемолитической анемии, АL-амилоидозе почек, и внутренних органов, болезни отложения легких цепей. Также парапротеин в сыворотке крови отмечается при болезни Кастелмана, POEMS синдроме и микседематозном лишае.
При скрининговых обследовниях выявляемость парапротеинемии резко увеличивается в популяции после достижения 50 лет и достигает 4–10% у лиц старше 65 лет. Однако большинство впервые выявленных случаев парапротеинемии в общей популяции представляют собой бессимптомные моноклональные гаммапатии невыясненного значения (МГНЗ). Концентрация парапротеина при МГНЗ существенно ниже 30 г/л и обычно не превышает 10–15 г/л. Кроме того, при МГНЗ парапротеин выявляется на фоне поликлональных иммуноглобулинов, т. е. угнетения нормального синтеза иммуноглобулинов не происходит. Термин “МГНЗ” указывает на случаи парапротеинемии без других признаков онкогематологического заболевания, которые не требуют ежегодного мониторинга, чтобы не пропустить момента озлакачествления процесса. При выявлении ПП у обследованных моложе 50 лет необходимы более частые повторные обследования, поскольку у них отмечается высокий риск развития ММ. Если концентрация ПП составляет более 15 г/л, вне зависимости от возраста рекомендуется проведение расширенного обследования, включающего электрофорез 24-часового образца мочи и иммунофиксацию каждые 3–6 месяцев, поскольку риск злокачественной трансформации очень высок.
Кроме того выделяют доброкачественную парапротеинемию, которая отмечается при сохранении парапротеина без прогрессирования в ММ или другое заболевание в течение 5 лет наблюдения. При транзиторной парапротеинемии концентрация парапротеина обычно ниже 3 г/л.
Источник