Иммунохимический анализ белков крови и мочи

Скрининг парапротеинемий в сыворотке крови с помощью иммунофиксации в Москве

• Приём, исследование биоматериала
• Описание

Приём и исследование биоматериала

Приём материала

• Можно сдать в отделении Гемотест
• Можно сдать анализ дома

Подробное описание исследования

При пролиферации клона плазматических клеток увеличивается синтез иммуноглобулина, представленного одним классом, подклассом и изотипом, в состав которого входят тяжелые и легкие белковые цепи одного типа. При электрофоретическом разделении белков сыворотки крови этот иммуноглобулин мигрирует в виде компактной полосы, которая определяется на фоне других белковых фракций. Такой иммуноглобулин называют моноклональным иммуноглобулином или парапротеином. При электрофорезе белков сыворотки его иногда называют М-пиком или М-градиентом. Парапротеин является онкомаркером при ряде гематоонкологических заболеваний.

Множественная миелома является классическим гематологическим заболеванием, которое обусловлено пролиферацией плазмацитов, секретирующих моноклональный иммуноглобулин (парапротеин) или его фрагменты. В большинстве случаев на момент диагноза концентрация парапротеина превышает 25 г/л.

При миеломе парапротеин в сыворотке крови чаще всего представлен IgG (60%), реже IgA (20%). Оставшиеся около 20% случаев приходятся на миелому Бенс-Джонса, связанную с продукцией свободных легких цепей каппа или лямбда (20%), которые могут быть обнаружены в моче. В 2-4% случаев миеломы может отмечаться биклональный парапротеин, представленный иммуноглобулинами разных классов или одного класса, но содержащий легкие цепи разных классов. Изменения концентрации парапротеина служит показателем эффективности лечения миеломы. Мониторинг концентрации ПП при миеломе на фоне терапии должен осуществляться каждые 3 месяца. Если содержание ПП снизилось ниже детектируемого, повторное измерение целесообразно проводить через 6 или 12 месяцев.

Макроглобулинемия Вальнедстрема представляет собой лимфому с продукцией моноклонального IgM. Лимфоплазмацитарные опухолевые клетки с характерным иммунофенотипом диффузно распределены в лимфатических узлах, селезенке и костном мозге. Высокая концентрация моноклонального IgM часто превышает 30 г/л и приводит к увеличению вязкости крови и ряду клинических проявлений, включающих спутанность сознания, слепоту, склонность к кровоточивости, сердечную недостаточность и гипертензию. При других разновидностях лимфом и хроническом лимфолейкозе парапротеины класса IgM отмечается у 20% больных, однако концентрация ПП обычно ниже, чем 30 г/л.

Моноклональный парапротеин может быть обнаружен при ряде неопухолевых заболеваний, в частности эссенциальной криоглобулинемии, парапротеинемической хронической полинейропатии, холодовой гемолитической анемии, АL-амилоидозе почек, и внутренних органов, болезни отложения легких цепей. Также парапротеин в сыворотке крови отмечается при болезни Кастелмана, POEMS синдроме и микседематозном лишае.

При скрининговых обследовниях выявляемость парапротеинемии резко увеличивается в популяции после достижения 50 лет и достигает 4-10% у лиц старше 65 лет. Однако большинство впервые выявленных случаев парапротеинемии в общей популяции представляют собой бессимптомные моноклональные гаммапатии невыясненного значения (МГНЗ). Концентрация парапротеина при МГНЗ существенно ниже 30 г/л и обычно не превышает 10-15 г/л. Кроме того, при МГНЗ парапротеин выявляется на фоне поликлональных иммуноглобулинов, т. е. угнетения нормального синтеза иммуноглобулинов не происходит. Термин «МГНЗ» указывает на случаи парапротеинемии без других признаков онкогематологического заболевания, которые не требуют ежегодного мониторинга, чтобы не пропустить момента озлакачествления процесса. При выявлении ПП у обследованных моложе 50 лет необходимы более частые повторные обследования, поскольку у них отмечается высокий риск развития ММ. Если концентрация ПП составляет более 15 г/л, вне зависимости от возраста рекомендуется проведение расширенного обследования, включающего электрофорез 24-часового образца мочи и иммунофиксацию каждые 3-6 месяцев, поскольку риск злокачественной трансформации очень высок.

Кроме того выделяют доброкачественную парапротеинемию, которая отмечается при сохранении парапротеина без прогрессирования в ММ или другое заболевание в течение 5 лет наблюдения. При транзиторной парапротеинемии концентрация парапротеина обычно ниже 3 г/л.

Источник

Иммуноцитохимическое исследование материала (6 и более маркеров) (кроме PTEN)

Определение экспрессии различных белков на поверхности клеток, основанное на высокоспецифической реакции антиген — антитело.

Синонимы русские

ИЦХ-анализ, иммуноцитохимия с антителами, иммуноцитохимическая оценка экспрессии белков, иммуноцитохимический тест.

Синонимы английские

Immunocytochemical (ICC) study, ICC tests, Immunocytochemical examination, Immunocytochemistry with antibody, Immunocytochemical study of antigen expressions.

Метод исследования

Жидкостная цитология с последующим иммуноцитохимическим исследованием (ИЦХ).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Аспират из полости матки.

Общая информация об исследовании

Жидкостная цитология — это метод, основанный на стандартизации технологии приготовления цитологических препаратов из жидкой клеточной суспензии. Существует несколько вариантов методик жидкостной цитологии, но все они позволяют сохранить структуру и архитектонику клеточных скоплений, при этом элементы крови, некроза не мешают просмотру и анализу клеток опухоли. В связи со сложностью морфологического строения опухолей и многообразия гистологических вариантов для точной верификации диагноза при цитологической диагностике применяют иммуноцитохимическое исследование.

ИЦХ исследование — это метод молекулярной иммунологической диагностики, используемый для оценки наличия специфического белка или антигена в клетках с использованием специфического антитела, которое связывается с ним, что позволяет визуализировать и анализировать под микроскопом. Данный метод позволяет проводить иммунологический анализ цитологического материала в условиях сохранения морфологии клеток. Результаты оцениваются качественно и количественно.

ИЦХ позволяет оценить, действительно ли клетки в конкретном образце экспрессируют данный антиген. В тех случаях, когда обнаружен иммуноположительный сигнал, становится возможным определять, где именно расположен антиген, степень его экспрессии.

Таким образом, иммуноцитохимическое исследование существенно расширяет возможности цитологической диагностики. Появляется возможность визуализации различных вне- и внутриклеточных маркеров, которые не определяются при обычном исследовании.

Существует много способов подготовки образцов клеток для иммуноцитохимического анализа. Каждый метод имеет свои сильные и уникальные характеристики, поэтому правильный метод может быть выбран для желаемого образца и результата.

Иммуноцитохимия на основе моноклональных антител является одним из наиболее ценных инструментов, доступных в клеточной биологии и патологии.

ИЦХ-анализ может проводиться как с моноклональными антителами, так и с поликлональнами. Важным, основным принципом является то, что с методологической точки зрения нет существенных различий между иммуноцитохимией на основе моноклональных и поликлональных антител. Специфичность первичного антитела является наиболее важной предпосылкой для надежной иммуноцитохимии.

Известно более 200 антител, используемых в качестве диагностических, прогностических и прогнозирующих биомаркеров. Вот несколько примеров:

• BrdU — для идентификации реплицируемых клеток; используется для выявления опухолей, а также при исследованиях нейронов;
• цитокератины — используются для идентификации карцином, но могут также экспрессироваться в некоторых саркомах;
• CD15 и CD30 — используются при лечении болезни Ходжкина;
• альфа-фетопротеин — для опухолей желточного мешка и гепатоцеллюлярной карциномы;
• CD117 — для желудочно-кишечных стромальных опухолей (GIST) и опухолей тучных клеток;
• CD10 — для карциномы почек и острого лимфобластного лейкоза;
• простатический специфический антиген (PSA) — для рака предстательной железы;
• Ber-EP4 — чувствительный эпителиальный маркер, используется, например, при дифференциальной диагностике реактивных и метастатических экссудатов при аденокарциноме (чувствительность — 96%, специфичность — 99%);.
• рецепторы стероидных гормонов (эстрогенов, прогестерона, андрогенов) используются как диагностически (рак молочной железы, эндометрия, яичников, десмоид, доброкачественная патология молочной железы), так и прогностически при раке молочной железы (прогнозирование реакции на терапию — рецептор эстрогена);
• DU-PAN-2 используется для выделения папиллярных карцином щитовидной железы от фолликулярных опухолей;
• идентификация В-клеточных лимфом с использованием CD20;
• идентификация Т-клеточных лимфом с использованием CD3.

Так, при раке молочной железы иммуноцитохимическое исследование позволяет определить гормональный фон, на котором возник опухолевый процесс, способность клеток к быстрому делению, чувствительность к химиопрепаратам и лучевой терапии. На основании цитологического заключения формируется вся дальнейшая тактика лечения, появляется возможность сделать терапию максимально эффективной при минимальных потерях. Использование метода позволяет выявить факторы, определяющие ответ опухоли на лечение. Исследование рецепторов эстрогенов и прогестерона, фактора пролиферативной активности Ki-67, онкопротеина C-erbB-2, белка р5, EGFR при раке молочной железы позволяет проводить эффективную целенаправленную таргетную терапию.

ИЦХ-анализ позволяет обнаружить даже единичные раковые клетки в лимфоузлах, костном мозге, биологических жидкостях, уточнить на догоспитальном этапе патогенез, определить прогноз заболевания, степень распространения опухолевого процесса и тактику лечения. 24% ИЦХ исследований проводится на пунктатах лимфатических узлов. ИЦХ исследования повышают достоверность определения гистогенеза новообразований в метастатически пораженных лимфатических узлах с 67 до 97 %.

Иммуноцитохимический анализ плевральных и перитонеальных выпотов в сложных диагностических случаях повышает результативность цитологического метода: чувствительность с 62 до 93 % и специфичность с 95 до 99 %.

При невыявленном первичном опухолевом очаге сочетание цитологического и ИЦХ исследований с использованием широкой панели моноклональных антител в 93% устанавливает локализацию опухоли.

При злокачественных недифференцированных новообразованиях иммуноцитохимические исследования позволяют диагностировать рак, меланому и лимфому с точностью до 90,3 %, 100 % и 87,5 % соответственно.

Также данное исследование позволяет избежать гипердиагностики опухолевого процесса при заподозренной патологии в результате рутинного цитологического исследования.

В настоящее время иммуноцитохимический метод является одним из самых мощных инструментов для определения наличия и локализации определенных веществ в микроскопических препаратах — клетках.

Для чего используется исследование?

• Для идентификации в клетках разнообразных молекулярных структур и соединений;
• для установления локализации в клетках определенных веществ;
• для определения источника метастаза или гистогенеза первичной опухоли;
• для определения степени вероятности прогрессии или регрессии предраковых состояний, прогноза заболевания;
• для определения степени распространенности опухолевого процесса;
• для выбора тактики лечения;
• для динамического наблюдения и контроля лечения;
• для выявления группы риска по развитию онкологических заболеваний и выбора правильной тактики ведения пациентов.

Когда назначается исследование?

• При наличии предракового заболевания;
• при дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных новообразований;
• при определении первичного очага метастазов;
• при обследовании в рамках диагностики онкологического заболевания (например, при иммунофенотипировании злокачественных лимфом);
• при всех случаях атипической цитологии;
• перед, во время и после проведения лечебного курса.

Что означают результаты?

Экспрессия определенных белков и ее интенсивность позволяют идентифицировать патологическое состояние, спрогнозировать риск развития онкологического заболевания, определить источник метастазов. Также результаты исследования помогают выбрать правильную тактику ведения пациента.

Результат исследования интерпретируется врачом с учетом всех значимых клинических, дополнительных лабораторных и инструментальных данных.



Важные замечания

• Для получения точного результата исследования необходимо следовать рекомендациям врача по подготовке к тесту, если таковые имеются.

Также рекомендуется

• [12-006] Цитологическое исследование пунктатов, соскобов других органов и тканей
• [12-027] Иммуногистохимическое исследование клинического материала (с использованием 1 антитела)
• [12-071] Гистологическое исследование биопсийного материала
• [12-050] Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала — окрашивание по Папаниколау (Рар-тест)

Кто назначает исследование?

Гинеколог, уролог, эндокринолог, онколог, цитолог.

Литература

• Онкология: национальное руководство/под ред. В.И. Чиссова, М.И. Давыдова. — М: ГЭОТАР-Медиа, 2008. — 1072 с. ISBN978-5-9704-0676-2.
• Kamoshida S1, Ogane N, Yasuda M, Muramatsu T, Bessho T, Kajiwara H, Osamura RY. . Immunohistochemical study of type-1 blood antigen expressions in thyroid tumors: the ificance for papillary carcinomas. Mod Pathol. 2000 Jul;13(7):736-41.
• Immunocytochemistry Methods and Protocols. Edited by Lorette C. Javois, 2nd edition, 1999. Human Press.
• Bosman FT. Monoclonal antibodies in immunocytochemistry. Acta Histochem Suppl. 1988;35:27-32.

Источник