Белок в моче с пирогаллоловым красным абрис

Принцип метода

При взаимодействии белка с пирогаллоловым красным и

молибдатом натрия образуется окрашенный комплекс,

интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации

белка в пробе.

Состав набора

Реагент (Р) — раствор пирогаллолового красного в сукцинатном

буфере, готовый к использованию.

Калибраторы — калибровочные растворы белка с низкой (0,20

г/л, используется для определения микропротеинурии) и высокой

(0,50 г/л, используется для определения протеинурии)

концентрацией белка, содержащие 70% альбумина и 30%

глобулина, готовые к использованию.

Хранение набора— при температуре 2-8°С в упаковке

предприятия-изготовителя в течение всего срока годности.

Стабильность реагента и калибраторов

После вскрытия реагент стабилен 6 мес, калибраторы — 3 мес. при хранении их в плотно закрытом виде при температуре 2-8°С в защищенном от света месте.

Нормальные величины

• моча — до 0,120 г/л (до 0,141 г/сут);
• спинномозговая жидкость (СМЖ) — 0,150-0,450 г/л.

Пробы для анализа

Моча, негемолизированная СМЖ.

Подготовка к анализу

1. СМЖ и мочу центрифугировать 10 мин при 2700-4000 об/мин.
2. Для проведения анализа использовать чистые, хорошо вымытые пробирки. Тестом на пригодность пробирок для анализа является отсутствие изменения цвета реагента. Если реагент синеет без добавления пробы — результаты определения белка будут завышены; поэтому следует сначала раскапать реагент, а затем добавлять мочу.
3. При постановке метода следует использовать новые кюветы, так как они не окрашиваются реагентом и реакционной пробой. Старые пластиковые кюветы (мутные, не прозрачные) не пригодны для измерения. Кюветы, бывшие в работе, перед использованием обработать следующим образом: выдержать 10 мин в моющем растворе (200 мл 5% раствора перекиси водорода или 1 мл моющего средства), после чего ополоснуть водопроводной и дистиллированной водой не менее 10 раз. Набор пригоден для проведения анализа на биохимических полуавтоматических и автоматических анализаторах.

Проведение анализа Длина волны: 598 (578-620) нм; длина оптического пути: 10 мм; температура: 18-25°С.

Реагент и калибратор перед проведением анализа выдержать при комнатной температуре около 30 минут.

Процедура 1 (определение протеинурии)

Пробы перемешать, выдержать 10 мин при комнатной температуре (18-25°С). Измерить оптическую плотность опытной (Е) и калибровочной (Ек) проб против контрольной (холостой) пробы. Окраска стабильна в течение 1 ч.

Аналитические характеристики (для процедуры 1)

Линейность — в диапазоне 0,070 — 2,00 г/л; чувствительность — не более 0,060 г/л; коэффициент вариации — не более 5%.

Процедура 2 (определение микропротеинурии)

Перемешать, выдержать 10 мин при комнатной температуре (18-

25°С). Измерить оптическую плотность опытной (Е) и

калибровочной (Ек) проб против контрольной (холостой) пробы.

Окраска стабильна в течение 1 ч.

Аналитические характеристики (для процедуры 2)

Линейность — до 0,40 г/л;

чувствительность — не более 0,010 г/л;

коэффициент вариации — не более 5%.

Расчет

Концентрацию белка в пробе (С) в г/л рассчитать по формуле:

С =Е/Ек х Ск . где

Ск — концентрация белка в калибраторе, г/л.

Примечания

1. Если концентрация белка в пробе превышает 2,00 г/л, пробу разбавить физиологическим раствором: мочу в 3 раза, СМЖ в 5-10 раз. Результат умножить на коэффициент разбавления.
2. Для проверки линейности использовать набор калибровочных образцов белка Новосо-БМ-ПГК, в котором белковый состав калибровочных образцов аналогичен белковому составу калибраторов набора.

Меры предосторожности

При работе с реагентом не следует допускать его попадания на

кожу. При попадании реагента на кожу тотчас промыть

пораженное место проточной водой.